希望Ⅲ号液改善臭氧加重二乙基亚硝胺致肝损伤的药效作用研究

作者:刘琳琳;张睿;彭金娥;赵欣;蔡大勇;王玥琦; 刊名:河北中医药学报 上传者:杨振山

【摘要】目的:探讨希望Ⅲ号液对臭氧加重二乙基亚硝胺(DEN)致大鼠肝损伤的治疗作用。方法:48只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、维生素E组、希望Ⅲ号液低、中、高剂量组,每组8只。对照组吸入新鲜空气,腹腔注射(ip)生理盐水50 mg/kg;各造模组腹腔注射DEN 50 mg/kg,每周2次,同时吸入臭氧(0.65±0.12)ppm,4 h/d,各组于造模2周后开始给药,其中对照组和模型组每天灌胃(ig)饮用水,各给药组同步灌胃维生素E(13.5 mg/kg)与希望Ⅲ号液(45、90、180 mg/kg)治疗。给药8周后取大鼠血清和肝脏组织,检测大鼠血清转氨酶(ALT和AST)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、碱性磷酸酶(ALP)和丙二醛(MDA)、分型超氧化物歧化酶(Cu Zn-SOD、T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;肝脏组织常规HE染色、Masson染色观察组织形态;形态剂量肝细胞体积构成比、肝胶原纤维体积比。结果:模型组大鼠血清ALT、AST、GST、ALP、MDA含量升高(P<0.01),Cu Zn-SOD、T-SOD和GSH-Px含量降低(P<0.01),肝细胞体积构成比增大(P<0.01),胶原纤维沉积增加(P<0.01)。希望Ⅲ号液能抑制大鼠血清ALT、AST、GST、ALP、MDA含量升高(P<0.01),回升Cu Zn-SOD、T-SOD和GSH-Px含量(P<0.01),回降肝细胞体积构成比和胶原纤维沉积增加(P<0.01)。结论:希望Ⅲ号液可以改善肝损伤状态下肝脏功能,调节肌体氧化应激过程,延缓肝脏纤维化进程,对臭氧加重DEN致大鼠肝损伤有保护作用。

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北京中医药大学基础医学院刘琳琳张睿彭金娥赵欣蔡大勇王玥琦(北京100029)《素问六节藏象论》曰:“天食人以五气,地食人以五味”,论及了环境与人之间的密切关系,指出天地对人的关爱,通过五气和五味体现出来。[1]作为亚硝胺类化合物的前体物质,亚硝酸盐在自然界中广泛存在,食物在加工过程中易转化成亚硝胺和其他N-亚硝基化合物,危害人体健康。[2]亚硝胺类化合物对肝脏损伤的研究已较为成熟,然而,人生活在自然环境中,受多元因素的影响,当前,我国近地表臭氧浓度受工业化进程的影响逐年攀升,大气臭氧污染日益严重,在人口密集的城市群地区情况尤为严重。[3]研究旨在探讨希望III号液对臭氧加重二乙基亚硝胺(DEN)致大鼠肝损伤的治疗作用。希望III号液主要由枸杞子和佛手组成,枸杞子补肾益精、养肝明目、补血安神,佛手理气化痰、舒肝健胃,二者合用,具有滋阴理气的功效。[4-6]1材料1.1动物Wistar大鼠[北京维通利华实验动物技术有限公司,SCXK(京)2012-0001],雄性,48只,SPF级,体质量180~200g。1.2药品和试剂希望III号液(主要由枸杞子和佛手组成,生药饮片均购自北京同仁堂药店,由北京中医药大学中医药基础理论与关键技术中心配制);维生素E软胶囊,每粒100mg,(天津市中央药业有限公司,批号:160410)。生化试剂盒ALT、AST、GST、ALP、MDA、CuZn-SOD、T-SOD、GSH-Px购自南京建成生物工程研究所(批号:20160704)。1.3仪器臭氧发生器(山东精工好医生仪器有限公司);酶标仪(MultiskanMK3,热电上海仪器有限公司);电子恒温水浴箱(北京长风仪器仪表公司);高速台式离心机(GT16-3型,北京时代北利离心机有限公司);旋涡混合器(QL-901,海门市麒麟医用仪器厂);石蜡包埋机(SleeMPS/P2型,德国SLEE);石蜡切片机(RM2245,德国Leica)。2方法2.1动物分组、造模及取材适应性喂养1周后,将大鼠按体质量随机分为对照组、模型组、维生素E组、希望III号液低、中、高剂量组,每组8只。对照组吸入新鲜空气,腹腔注射(ip)生理盐水50mg/kg;各造模组腹腔注射DEN50mg/kg,每周2次,同时吸入臭氧(0.650.12)ppm,4h/d,染毒柜与臭氧发生器连接,参照国家标准(靛蓝二磺酸钠分光光度法)实时监测染毒柜内的臭氧浓度,2周后结束造模,开始给药,其中对照组和模型组每天灌胃(ig)饮用水,各给药组同步灌胃维生素E(13.5mg/kg)与希望III号液(45、90、180mg/kg)治疗。给药8周后取材,腹主动脉取血,分离取血清;取肝脏组织于中性福尔马林中固定48h。2.2指标检测2.2.1血清生化指标检测:腹主动脉取血,分离血清,按试剂盒说明书检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、碱性磷酸酶(ALP)、丙二醛(MDA)、分型超氧化物歧化酶(CuZn-SOD、T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。2.2.2组织病理学形态观察:取肝脏组织于中性福尔马林中固定48h,换PBS,将肝脏组织修成1cm1cm的方块,梯度酒精脱水、二甲苯固定、浸蜡之后,将组织包埋成蜡块,切片机3~4m切片,HE染色、Masson染色进行组织形态学观察,对比分析各组大鼠肝脏组织病理变化。2.2.3形态计量:将病理切片在4010倍数下进行扫描,保存病理图片。肝细胞体积构成比、肝胶原纤维体积比使用Image-ProPlus软件进行分析。2.3统计学分析使用

参考文献

引证文献

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